藥品微生物實驗室規(guī)范指導(dǎo)原則用于指導(dǎo)藥品微生物檢驗實驗室的質(zhì)量控制。

     藥品微生物的檢驗結(jié)果受很多因素的影響，如樣品中微生物可能分布不均勻、微生物檢驗方法的誤差較大等。因此，在藥品微生物檢驗中，為保證檢驗結(jié)果的可靠性，必須使用經(jīng)驗證的檢測方法并嚴(yán)格按照藥品微生物實驗室規(guī)范要求進(jìn)行試驗。

     藥品微生物實驗室規(guī)范包括以下幾個方面：人員、培養(yǎng)基、菌種、實驗室的布局和運行、設(shè)備、文件、實驗記錄、結(jié)果的判斷等。

人員

      從事藥品微生物試驗工作的人員應(yīng)具備微生物學(xué)或相近專業(yè)知識的教育背景。

      實驗人員應(yīng)依據(jù)所在崗位和職責(zé)接受相應(yīng)的培訓(xùn)，在確認(rèn)他們可以承擔(dān)某一試驗前，他們不能獨立從事該項微生物試驗。應(yīng)保證所有人員在上崗前接受勝任工作所必需的設(shè)備操作、微生物檢驗技術(shù)和實驗室生物安全等方面的培訓(xùn)，經(jīng)考核合格后方可上崗，同時，實驗室應(yīng)制定所有級別實驗人員的繼續(xù)教育計劃。

     檢驗人員必須熟悉相關(guān)檢測方法、程序、檢測目的和結(jié)果評價。微生物實驗室的管理者其專業(yè)技能和經(jīng)驗水平應(yīng)與他們的職責(zé)范圍相符，如：管理技能、實驗室安全、試驗安排、預(yù)算、實驗研究、實驗結(jié)果的評估和數(shù)據(jù)偏差的調(diào)查、技術(shù)報告書寫等。

     實驗室應(yīng)通過參加內(nèi)部質(zhì)量控制、能力驗證或使用標(biāo)準(zhǔn)菌株等方法客觀評估檢驗人員的能力，必要時對其進(jìn)行再培訓(xùn)并重新評估。當(dāng)使用一種非經(jīng)常使用的方法或技術(shù)時，有必要在檢測前確認(rèn)微生物檢測人員的操作技能。

      所有人員的培訓(xùn)、考核內(nèi)容和結(jié)果均應(yīng)記錄歸檔。

培養(yǎng)基

      培養(yǎng)基是微生物試驗的基礎(chǔ)，直接影響微生物試驗結(jié)果。適宜的培養(yǎng)基制備方法、貯藏條件和質(zhì)量控制試驗是提供優(yōu)質(zhì)培養(yǎng)基的保證。

     1 ．培養(yǎng)基的制備

      培養(yǎng)基可按處方配制，也可使用按處方生產(chǎn)的符合規(guī)定的脫水培養(yǎng)基。

      在制備培養(yǎng)基時，應(yīng)選擇質(zhì)量符合要求的脫水培養(yǎng)基或單獨配方組分進(jìn)行配制。脫水培養(yǎng)基應(yīng)附有處方和使用說明，配制時應(yīng)按使用說明上的要求操作以確保培養(yǎng)基的質(zhì)量符合要求，不得使用結(jié)塊或顏色發(fā)生改變的脫水培養(yǎng)基。脫水培養(yǎng)基或單獨配方組分應(yīng)在適當(dāng)?shù)臈l件下貯藏，如低溫、干燥和避光，所有的容器應(yīng)密封，尤其是盛放脫水培養(yǎng)基的容器。商品化的成品培養(yǎng)基除了應(yīng)附有處方和使用說明外，還應(yīng)注明有效期、貯藏條件、適用性檢查試驗的質(zhì)控菌和用途。

      為保證培養(yǎng)基質(zhì)量的穩(wěn)定可靠，各脫水培養(yǎng)基或各配方組分應(yīng)準(zhǔn)確稱量，并要求有一定的精確度。配制培養(yǎng)基&最&常&用的溶劑是純化水，特殊情況下，可能需要用去離子水和蒸餾水。應(yīng)記錄各稱量物的重量和水的使用量。

      配制培養(yǎng)基所用容器和配套器具應(yīng)潔凈，可用純化水沖洗玻璃器皿以消除清潔劑和外來物質(zhì)的殘留，對熱敏感的培養(yǎng)基如糖發(fā)酵培養(yǎng)基其分裝容器一般應(yīng)預(yù)先進(jìn)行滅菌，以保證培養(yǎng)基的無菌性。

      脫水培養(yǎng)基應(yīng)完&全溶解于水中，再行分裝與滅菌。配制時若需要加熱助溶，應(yīng)注意不要過度加熱，以避免培養(yǎng)基顏色變深。如需要添加其他組分時，加入后充分混勻。應(yīng)按照生產(chǎn)商提供或使用者驗證的參數(shù)進(jìn)行培養(yǎng)基的滅菌。商品化的成品培養(yǎng)基必須附有所用滅菌方法的資料。培養(yǎng)基滅菌一般采用濕熱滅菌技術(shù)，特殊培養(yǎng)基可采用薄膜過濾除菌。

      培養(yǎng)基若采用不適當(dāng)?shù)募訜岷蜏缇鷹l件，有可能引起顏色變化、透明度降低、瓊脂凝固力或pH 的改變。因此，培養(yǎng)基應(yīng)采用驗證的滅菌程序滅菌，培養(yǎng)基滅菌方法和條件，應(yīng)通過無菌性試驗和促生長試驗進(jìn)行驗證。此外，對高壓滅菌器的蒸汽循環(huán)系統(tǒng)也要加以驗證，以保證在一定裝載方式下的正常熱分布。溫度緩慢上升的高壓滅菌器可能導(dǎo)致培養(yǎng)基的過熱，過度滅菌可能會破壞絕大多數(shù)的細(xì)菌和真菌培養(yǎng)基促生長的質(zhì)量。滅菌器中培養(yǎng)基的容積和裝載方式也將影響加熱的速度。因此，應(yīng)根據(jù)滅菌培養(yǎng)基的特性，進(jìn)行全面的滅菌程序驗證。

      應(yīng)確定每批培養(yǎng)基滅菌后的pH值（冷卻至室溫25 ℃ 測定）。若培養(yǎng)基處方中未列出pH 值的范圍，除非經(jīng)驗證表明培養(yǎng)基的pH 值允許的變化范圍很寬，否則，pH值的范圍不能超過規(guī)定值士0.2 。

      制成平板或分裝于試管的培養(yǎng)基應(yīng)進(jìn)行下列檢查：容器和蓋子不得破裂，裝量應(yīng)相同，盡量避免形成氣泡，固體培養(yǎng)基表面不得產(chǎn)生裂縫或漣漪，在冷藏溫度下不得形成結(jié)晶，不得污染微生物等。應(yīng)檢查和記錄批數(shù)量、有效期及培養(yǎng)基的無菌檢查。

      2 ．培養(yǎng)基的貯藏

自配的培養(yǎng)基應(yīng)標(biāo)記名稱、批號、配制日期等信息，并在已驗證的條件下貯藏。商品化的成品培養(yǎng)基標(biāo)簽上應(yīng)標(biāo)有名稱、批號、生產(chǎn)日期、失效期及培養(yǎng)基的有關(guān)特性，生產(chǎn)商和使用者應(yīng)根據(jù)培養(yǎng)基使用說明書上的要求進(jìn)行貯藏，所采用的貯藏和運輸條件應(yīng)使成品培養(yǎng)基最&低限度的失去水分并提供機(jī)械保護(hù)。

      培養(yǎng)基滅菌后若貯藏在高壓滅菌器中，質(zhì)量可能會受影響，一般不提倡這種存放法。瓊脂培養(yǎng)基不得在O ℃ 或O ℃ 以下存放，因為冷凍可能破壞凝膠特性。培養(yǎng)基應(yīng)避光保存，若要長期保存，應(yīng)置于密閉容器中以防止水分流失。瓊脂平板最好現(xiàn)配現(xiàn)用，如置冰箱保存，一般不超過1周，且應(yīng)密閉包裝，若延長保存期限，保存期需經(jīng)驗證確定。

      固體培養(yǎng)基滅菌后的再融化只允許1 次，以避免因過度受熱造成培養(yǎng)基質(zhì)量下降或微生物污染。培養(yǎng)基的再融化一般采用水浴或流通蒸汽加熱。若使用微波爐，應(yīng)避免培養(yǎng)基過度受熱及水分的蒸發(fā)，更要注意安全。融化的培養(yǎng)基應(yīng)置于45 ～50 ℃ 的水浴中，不得超過8 小時。傾注培養(yǎng)基時， 應(yīng)擦干培養(yǎng)基容器外表面的水分，避免容器外壁的水滴進(jìn)人培養(yǎng)基中造成污染。

      使用過的培養(yǎng)基（包括失效的培養(yǎng)基）應(yīng)按照國家污染廢物處理相關(guān)規(guī)定進(jìn)行。

      3 ．質(zhì)量控制試驗

      實驗室應(yīng)對試驗用培養(yǎng)基建立質(zhì)量控制程序，以確保所用培養(yǎng)基質(zhì)量符合相關(guān)檢測的需要。

      實驗室配制或商品化的成品培養(yǎng)基的質(zhì)量依賴于其制備過程，采用不適宜方法制備的培養(yǎng)基將影響微生物的生長或復(fù)蘇，從而影響試驗結(jié)果的可靠性。

      所有配制好的培養(yǎng)基均應(yīng)進(jìn)行質(zhì)量控制試驗。實驗室配制的培養(yǎng)基的常規(guī)監(jiān)控項目是pH 、適用性檢查試驗，定期的穩(wěn)定性檢查以確定有效期。培養(yǎng)基在有效期內(nèi)應(yīng)依據(jù)適用性檢查試驗確定培養(yǎng)基質(zhì)量是否符合要求。有效期的長短將取決于在一定存放條件下（包括容器特性及密封性）的培養(yǎng)基其組成成分的穩(wěn)定性。

      除藥典附錄另有規(guī)定外，在實驗室中，若采用已驗證的配制和滅菌程序制備培養(yǎng)基且過程受控，那么同一批脫水培養(yǎng)基的適用性檢查試驗可只進(jìn)行1 次。如果培養(yǎng)基的制備過程未經(jīng)驗證，那么每一批培養(yǎng)基均要進(jìn)行適用性檢查試驗，試驗的菌種可根據(jù)培養(yǎng)基的用途從相關(guān)附錄中進(jìn)行選擇，也可增加從生產(chǎn)環(huán)境及產(chǎn)品中常見的污染菌株。

      培養(yǎng)基的質(zhì)屋控制試驗若不符合規(guī)定，應(yīng)尋找不合格的原因，以防止問題重復(fù)出現(xiàn)。任何不符合要求的培養(yǎng)基均不能使用。

      用于環(huán)境監(jiān)控的培養(yǎng)基須特別防護(hù)，最好要雙層包裝和終端滅菌，如果不能采用終端滅菌的培養(yǎng)基，那么在使用前應(yīng)進(jìn)行100 ％的預(yù)培養(yǎng)以防止外來的污染物帶到環(huán)境中及避免出現(xiàn)假陽性結(jié)果。

菌種

      試驗過程中，生物樣本可能是最敏感的，因為它們的活性和特性依賴于合適的試驗操作和貯藏條件。實驗室菌種的處理和保藏的程序應(yīng)標(biāo)準(zhǔn)化，使盡可能減少菌種污染和生長特性的改變。按統(tǒng)一操作程序制備的菌株是微生物試驗結(jié)果一致性的重要保證。

      藥品微生物檢驗用的試驗菌應(yīng)來自認(rèn)可的國內(nèi)或國外菌種保藏機(jī)構(gòu)的標(biāo)準(zhǔn)菌株，或使用與標(biāo)準(zhǔn)菌株所有相關(guān)特性等效的商業(yè)派生菌株。

      標(biāo)準(zhǔn)菌株的復(fù)活或培養(yǎng)物的制備應(yīng)按供應(yīng)商提供的說明或按已驗證的方法進(jìn)行。從國內(nèi)或國外菌種保藏機(jī)構(gòu)獲得的標(biāo)準(zhǔn)菌株經(jīng)過復(fù)活并在適宜的培養(yǎng)基中生長后，即為標(biāo)準(zhǔn)儲備菌株。標(biāo)準(zhǔn)儲備菌株應(yīng)進(jìn)行純度和特性確認(rèn)。標(biāo)準(zhǔn)儲備菌株保存時，可將培養(yǎng)物等份懸浮于抗冷凍的培養(yǎng)基中，并分裝于小瓶中，建議采用低溫冷凍干燥、液氮貯存、超低溫冷凍（低于-30 ℃ ）等方法保存。低于-70 ℃ 或低溫冷凍干燥方法可以延長菌種保存時間。標(biāo)準(zhǔn)儲備菌株可用于制備每月或每周1 次轉(zhuǎn)種的工作菌株。冷凍菌種一旦解凍轉(zhuǎn)種制備工作菌株后，不得重新冷凍和再次使用。

       工作菌株的傳代次數(shù)應(yīng)嚴(yán)格控制，不得超過5 代（從菌種保藏機(jī)構(gòu)獲得的標(biāo)準(zhǔn)菌株為第0代），以防止過度的傳代增加菌種變異的風(fēng)險。1 代是指將活的培養(yǎng)物接種到微生物生長的新鮮培養(yǎng)基中培養(yǎng)，任何亞培養(yǎng)的形式均被認(rèn)為是轉(zhuǎn)種或傳代1 次。必要時，實驗室應(yīng)對工作菌株的特性和純度進(jìn)行確認(rèn)。

       工作菌株不可替代標(biāo)準(zhǔn)菌株，標(biāo)準(zhǔn)菌株的商業(yè)衍生物僅可用作工作菌株。

       實驗室必須建立和保存其所有菌種的進(jìn)出、收集、貯藏、確認(rèn)試驗以及銷毀的記錄，應(yīng)有菌種管理的程序文件（從標(biāo)準(zhǔn)菌株到工作菌株），該程序包括：標(biāo)準(zhǔn)菌種的申購記錄；從標(biāo)準(zhǔn)菌株到工作菌株操作及記錄，菌種必須定期轉(zhuǎn)種傳代，并做純度、特性等實驗室所需關(guān)鍵指標(biāo)的確認(rèn)，并記錄；每支菌種都應(yīng)注明其名稱、標(biāo)準(zhǔn)號、接種日期、傳代數(shù)；菌種生長的培養(yǎng)基和培養(yǎng)條件；菌種保藏的位置和條件；其他需要的程序。

實驗室的布局和運行

      實驗室應(yīng)具有進(jìn)行微生物檢測所需的適宜、充分的設(shè)施條件。實驗室的布局與設(shè)計應(yīng)充分考慮到良好微生物實驗室操作規(guī)范和實驗室安全的要求。實驗室布局設(shè)計的基本原則是既要最大可能防止微生物的污染，又要防止檢驗過程對環(huán)境和人員造成危害?；顒訁^(qū)域的合理規(guī)劃及區(qū)分將提高微生物實驗室操作的可靠性。

      通常，實驗室應(yīng)劃分成相應(yīng)的潔凈區(qū)域和活菌操作區(qū)域，同時應(yīng)根據(jù)試驗?zāi)康模跁r間或空間上有效分隔不相容的試驗活動，將交叉污染的風(fēng)險降低到最&低